3、疫情追踪
疫情处理期间通过每天调查填报《医务室流感样病例统计表(周报)》(附表3)、《流行性感冒病例调查一览表》(附表2)和《学校或集体单位流感暴发点每日新增流感样病例统计表》(附表4),及时汇总分析暴发疫情动态。疾病预防控制中心对于涉疫单位通过《流行性感冒病例调查一览表》上报的新发病例进行调查核实,及时掌握和评估疫情趋势,为检讨、调整控制处理措施提供依据。疫情的追踪应该至少持续最后一个病例出现后一周。在暴发疫情控制后一周内,更正《流感及流感样病例暴发疫情监测报告表》内容包括末例病例发病时间、发病数和死亡数、样本采集、送检和实验室检测结果等,并传真至上级疾控机构。
(二)样本采集
发生疫情的当地疾病预防控制机构负责暴发疫情病例样本的采集。
1、采样种类
采集流感样病例的咽拭子或咽漱液,以及血清样本。
2、采样对象
(1)咽拭子/咽漱液:发病3天内,未服用抗病毒药物(金刚烷胺、金刚乙胺、达菲)的流感样病例。
(2)急性期血清:发病后7天内的流感样病例。
(3)恢复期血清:发病后2~4周的流感样病例。
3、采样方法
(1)咽拭子采集:对婴幼儿患者采集样本时,先将棉拭子用Hank氏液(PH7.4)蘸湿,在试管壁挤干后,在被检者鼻咽部涂抹数次,然后将棉拭子置于含有3mlHank氏液的试管内送检。对大于5岁患者采集样本时,棉拭子可不必用Hank氏液蘸湿。
(2)咽漱液采集:先让患者咳嗽数次,然后用Hank氏液5~10ml昂头含漱几次后,吐入无菌广口瓶中。
(3)血清采集:采集静脉血5ml,离心后取上清液装至血清管中。
4、样本采集数量
每一起暴发疫情一般采集10份左右咽拭子样本(如果现症病例在10例以下的,就全部都要采样)及10份急性期血清与恢复期血清。
5、样本的保存和运送
采集人员填写《流感样病例暴发疫情病例样本原始登记送检表》(表5),并将样本送至能开展相应检测的实验室。
快速检测的标本,可在现场进行检测,或送至具有流感快速诊断试剂盒的疾控机构实验室进行检测。
用于病毒分离和RT-PCR检测的样本采集后应在4℃条件下,24小时内运送至流感病毒分离实验室,未能24小时内送至实验室的,应置-70℃或以下保存。
血清样本可暂冻存在-20 ℃以下冰箱。
(三)样本检测
1、实验室检测的目的
核实暴发疫情是否为流感暴发。并对分离到流感病毒进行抗原性和基因特性分析。
2、实验室检测方法的选择原则
流感及流感样病例暴发疫情中常用的检测方法有流感快速诊断试剂盒检测、RT-PCR检测、病毒分离培养和血清学检测。其中流感快速检测和RT-PCR检测可用于早期、快速的实验室检测。
具备流感快速检测和RT-PCR检测条件的地区,可选择这两种快速检测方法,尽快明确疫情性质。不具备流感快速检测和RT-PCR检测条件的地区,应尽量采集标本,送全国流感监测网络实验室开展常规的流感病毒分离鉴定。
无论是否进行流感快速诊断试剂盒检测和RT-PCR检测,都应进行常规的流感病毒分离鉴定。尤其是流感快速检测和RT-PCR检测阳性的标本,应尽量分离到流感病毒。
血清学检测在流感及流感样病例暴发疫情中仅作为一种推荐方法,供有条件的地区使用。
血清学检测必须采集病例急性期和恢复期双份血清,如恢复期血清特异性抗体较急性期增高4倍或以上,方可诊断。由于多数正常人血清含有流感病毒抗体,因此单份血清无法用于疫情的核实诊断。但如有合适的对照群体(50人份以上),单份血清可用来推断暴发流行的病因。
3、流感快速诊断试剂盒检测
流感快速诊断试剂盒可检测流感病毒的NP抗原和M1抗原,用于暴发疫情中流感样病例咽、鼻拭子或含漱液标本的快速检测。能在30分钟内提供检测结果,初步判断疫情性质,可在现场中使用,操作简便。
但这种快速检测比病毒分离培养或RT-PCR的敏感性低,无法确定流感病毒的亚型,部分试剂盒不能区分A型或B型流感病毒的感染,无法获得毒株及其分子生物学和抗原特征的信息。
4、RT-PCR法检测病毒核酸
RT-PCR是一种检测流感病毒核酸的方法,它能检测出非常低水平的流感病毒的核酸,不管病毒是否具有活性均可进行测定。可选择区分流感病毒的A型通用引物(Universal primer)、B型引物和能区分A型流感病毒不同亚型的引物同时进行试验。
5、病毒分离鉴定
病毒分离鉴定是流感实验室诊断中最常用、高度敏感、最准确的方法之一,所分离到的病毒可长期保存,并进行抗原性、基因特性分析。因此在暴发疫情中,常规用于实验室检测,具体内容同流感样病例的病原学监测。
6、血清学检测
病例的急性期和恢复期双份血清,可采用国家流感中心每年提供的4种标准参照抗原,进行红细胞凝集抑制(HI)试验,如恢复期血清特异性抗体较急性期增高4倍或以上,方进行诊断。
如果仅采集到病例的单份血清,可在相邻无流感暴发的地区,采集相应对照人群(50人份以上)的血清,进行红细胞凝集抑制试验(HI),推断暴发流行的病因。
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